总抗氧化能力(T-AOC) 检测试剂盒(A015-1)

使用说明书

仅供体外研究使用,不用于临床诊断!

第1版(2016年04月修订)

[预期应用]

本试剂可测血清、血浆、组织,植物提取液等样本中总抗氧化能力(T-AOC)

机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系。该防御体系包括酶促体系与非酶促体系。许多是以微量元素为话性中心,例如:超氧化物歧化(SOD)、谷胱甘过氧化物(GSH-PX)、过氧化氢酶(CAT). 谷胱甘肽-S-转移商(GST)等,非酶促反应体系中主要为维生素、氨基和金属蛋白质。例如,VE胡萝卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨服、色氨被、组氨酸、葡萄糖、兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径。(1)消除自由基和活性氧以免引发质过氧化: (2)分解过氧化物,阻断过氧化链。(3)除去起催化作用的金属离子。防御体系各成份之间相互起到了协同作用,以及代偿作用与依赖作用。

 

[试剂盒内容]

试剂

数量(96T/48T)

试剂

数量(96T/48T)

Reagent 1

2×60ml/1×60ml

Reagent 4

1×24ml/1×12ml

Reagent 2

2/1

Reagent 5

1×24ml/1×12ml

Reagent 3

1×5ml/1×3ml

说明书

1

Reagent 3稀释液

1×60ml/1×30ml




[需自备的设备及试剂]

1、分光光度计(比色测定波长为520nm)              

2、恒温水浴箱或恒温箱(孵育温度:37℃和90~100℃)              

3、台式离心机              

4、微量移液器及吸头            

5、漩涡混合仪        

6、蒸馏水或去离子水

 

[试剂盒的储存及有效期]

试剂盒2-8可保存6个月

1. Reagent 1:无色液体,  2-8保存。              

2. Reagent 2:白色晶体,  2-8避光保存。              

3. Reagent 3:黄色溶-20避光可保存1年。     

4. Reagent 3稀释液:2-8保存。        

5. Reagent 4:无色粘稠液体,室温保存。            

6. Reagent 5:无色液体,  室温保存。      

        

[试剂准备]

1. Reagent 2配制:使用时,加入120ml双蒸馏水溶解(粉末难溶,可置于37℃加快溶解速度)

2. Reagent 3工作液制备:用R3稀释液按1:19的比例稀释R3建议在使用前按所需量配制。

 

[标本处理]

1. 组织样本              

预处理:准确称量样品,按比例加入生理盐水,如1g样品加入9g生理盐水。在冰上匀浆于4oC,12000 rpm/min 离心5min ,取上清液用于实验。   

注意:对于组织样本和细胞,需检测总蛋白浓度。建议使用IS003 BCA蛋白定量检测试剂盒测定蛋白质浓度。

       

2. 全血    

收集抗凝全血肝素为抗凝剂,轻轻颠倒充分抗凝后,可直接定量吸取全血,用冷双蒸水按1:9比例制备溶血液如取0.02ml全血,加入0.18ml双蒸水,混匀后制备1:9全血稀释液;也可定量吸取全血,转入EP管,低温冻存(温度越低越好),测定之前解冻并按比例加入冷双蒸水制成1:9全血稀释液用于检测。         

注意:不推荐使用EDTA作为抗凝剂。

 

[操作步骤]

1. 血清/血浆 T-AOC 实验

操作表:



样本管 (U) (ml)

对照管 (C) (ml) 

Reagent 1

11

血清/血浆

a*


Reagent 2

22
Reagent 3工作液0.50.5
漩涡混合仪混匀,37℃水浴30分钟。

Reagent 4

0.10.1

血清/血浆


a*

静置10分钟, 移液至比色皿(1cm light path), 在520nm波长测量各孔O.D.值(用蒸馏水调零)。 

* 推荐样本量:血清/血浆, a*=0.1ml.

 

2. 组织T-AOC实验

操作表:



样本管 (U) (ml)

对照管 (C) (ml) 

Reagent 1

11

10%组织匀浆

a*


Reagent 2

22
Reagent 3工作液0.50.5
漩涡混合仪混匀,37℃水浴30分钟。

Reagent 4

0.20.2
10%组织匀浆

a*

Reagent 50.20.2
静置10分钟, 移液至比色皿(1cm light path), 在520nm波长测量各孔O.D.值(用蒸馏水调零)。 

* 推荐样本量:10%组织匀浆, a*= 0.1~0.2ml.


 

3. 全血T-AOC实验

操作表:


样本管 (U) (ml)

对照管 (C) (ml) 

Reagent 1

11


1:9全血稀释液 

a*


Reagent 2

22
Reagent 3工作液0.50.5
漩涡混合仪混匀,37℃水浴30分钟

Reagent 4

0.10.1

1:9全血稀释液 


a*

静置10分钟, 移液至比色皿(1cm light path), 在520nm波长测量各孔O.D.值(用蒸馏水调零)。 

* 推荐样本量:1:9全血稀释液, a*=0.05ml.

 

[实验原理]

生物体内含有多种抗氧化化合物,能Fe3+还原成Fe2+,Fe2+与菲罗啉反应生成稳定的络合物。它可以通过测量OD值来计算T-AOC。

 

[说明]

1. 样本不立即用于实验(如血清、血浆、组织等),可置于-80℃或低于-20℃保存。保存温度越低样本保存时间越长。

2. 垂直样品和试剂,不试管表面。

3. 加入Reagent 1后加入样品,充分混合。

4. 如果检测如鼓膜组织、牙髓等微型样本,请用煮沸肥皂液彻底清洁试管。

5. 请选用洁净的试管 用于检测T-AOC、总氨基酸、VC、Ve的试管不建议用于测定SOD、GSH-PX、ATPase等以免试管的残留物影响酶活性。

6. 用于T-AOC、总氨基酸、VC、Ve的试管洗涤时,先用煮沸的热洗涤剂溶液洗涤再用自来水冲洗10次以上,然后用蒸馏水漂洗一次,烘干或晾干 以避免其他酶影响测量结果。

7. 实验中,在37℃水浴30分钟后试管中出现一些沉积物,这些沉积物在加入Reagent 4消失,不会影响结果。

8. 为了使液体混合均匀推荐使用涡流混合

9. Reagent 4不易吸取,移液时,请缓慢取和加入

10. 该试剂盒仅供体外科研和实验室使用

 

[下载]

MSDA


  • Total Anti-Oxidative Capability (T-AOC)Assay Kit(A015-1)
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