饥饿素(GHRL)检测试剂盒(化学发光免疫分析法)

CLIA Kit for Ghrelin (GHRL)

MTLRP; Growth Hormone-Releasing Peptide

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  • Certificate 通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证

特异性

本试剂盒用于检测饥饿素(GHRL),经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制,不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测,因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的饥饿素(GHRL)(加标样品),重复测定并计算其均值,回收率为测定值与理论值的比率。

样本 回收率范围(%) 平均回收率(%)
serum(n=5) 96-105 101
EDTA plasma(n=5) 79-93 89
heparin plasma(n=5) 80-97 93

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差:取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差:选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定,每个样本使用同一试剂盒重复测定8次,分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差: CV<10%
批间差: CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的饥饿素(GHRL),并倍比稀释成1:2,1:4,1:8,1:16的待测样本,线性范围即为稀释后样本中饥饿素(GHRL)含量的测定值与理论值的比率。

样本 1:2 1:4 1:8 1:16
serum(n=5) 80-105% 99-105% 86-94% 90-102%
EDTA plasma(n=5) 94-103% 98-105% 79-96% 78-98%
heparin plasma(n=5) 79-92% 81-90% 97-105% 80-95%

稳定性

经测定,试剂盒在有效期内按推荐温度保存,其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响,实验室的环境条件需尽量保持一致,尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

试剂盒内容

试剂名称 数量 试剂名称 数量
96孔板(预包被) 1 96孔板覆膜 4
标准品 2 标准品稀释液 1×20mL
检测溶液A 1×120µL 检测稀释液A 1×12mL
检测溶液B 1×120µL 检测稀释液B 1×12mL
底物A 1×10mL 底物B 1×2mL
浓洗涤液 (30 × concentrate) 1×20mL 说明书 1

实验流程

1. 实验前标准品、试剂及样本的准备;
2. 加样(标准品及样本)50µL,
    加入50µL检测液A(临用前配制);
    37°C温育1小时。
3. 洗板3次;
4. 加检测溶液B100µL,37°C孵育30分钟;
5. 洗板5次;
6. 加底物100µL,37°C孵育10分钟;
7. 读数。

CLIA Kit for Ghrelin (GHRL)

实验原理

本试剂盒应用竞争抑制酶联免疫分析法测定标本中待测物质水平。将饥饿素(GHRL)单克隆抗体包被微孔板,制成固相载体,往包被抗体的微孔中同时加入生物素标记的抗原和待测抗原(标准品或样本),待测抗原与生物素标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。温育后经洗涤去掉未结合物,然后加入HRP标记的亲和素,再次彻底洗涤后加入底物。加入底物后会产生辉光型光信号。发射光强度和样品中的饥饿素(GHRL)呈负相关。用化学发光仪测定相对光单位(RLU),计算样品浓度。

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参考文献

杂志 参考文献
Archives of Oral Biology Expression of ghrelin in human salivary glands and its levels in saliva and serum in Chinese obese children and adolescents [PubMed: 21075359]
Department of Medical Biochemistry and Clinical Biochemistry Presence of adropin, nesfatin-1, apelin-12, ghrelins and salusins peptides in the milk, cheese whey and plasma of dairy cows [ScienceDirect: S0196978113000533]
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Gene The modifying effects of fish oil on fasting ghrelin mRNA expression in weaned rats [PubMed: 22842192]
Hormone Research in Paediatrics Changes in Ghrelin and Obestatin Levels before and after a Meal in Children with Simple Obesity and Anorexia [Pubmed: 23774845]
Surgical Innovation Gastric supply manipulation to modulate ghrelin production and enhance vascularization to the cardia: proof of the concept in a porcine model [Pubmed:25294792]
Obesity Surgery Embolization of Arterial Gastric Supply in Obesity (EMBARGO): an Endovascular Approach in the Management of Morbid Obesity. Proof of the Concept in the Porcine Model [Pubmed:25511751]
Obes Surg Effect of Sleeve Gastrectomy Plus Side-to-Side Jejunoileal Anastomosis for Type 2 Diabetes Control in an Obese Rat Model [PubMed: 26202420]
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World Journal of Gastroenterology Effects of sleeve gastrectomy with jejuno-jejunal or jejuno-ileal loop onglycolipid metabolism in diabetic rats. [pubmed:27621579]
Ginekologia Polska Increased serum ghrelin in preeclampsia: is ghrelin a friend or a foe? [pubmed:27321099]
Gynecological Endocrinology The association between serum ghrelin levels and large-for-gestational-age fetuses in patients with gestational diabetes mellitus [pubmed:27791436]
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