硝基酪氨酸(NT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)

ELISA Kit for Nitrotyrosine (NT)

3-Nitro-L-Tyrosine; 3-Nitrotyrosine

  • 硝基酪氨酸(NT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 产品包装(模拟)
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  • 硝基酪氨酸(NT)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 实验结果图
  • CEB863Ge.jpg 标准曲线图
  • Certificate 通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证

特异性

本试剂盒用于检测硝基酪氨酸(NT)，经检测与其它相似物质无明显交叉反应。
由于受到技术及样本来源的限制，不可能完成对所有相关或相似物质交叉反应检测，因此本试剂盒有可能与未经检测的其它物质有交叉反应。

回收率

分别于定值血清及血浆样本中加入一定量的硝基酪氨酸(NT)（加标样品），重复测定并计算其均值，回收率为测定值与理论值的比率。

样本 回收率范围(%) 平均回收率(%)
serum(n=5) 83-105 91
EDTA plasma(n=5) 98-105 101

精密度

精密度用样品测定值的变异系数CV表示。CV(%) = SD/mean×100
批内差：取同批次试剂盒对低、中、高值定值样本进行定量检测,每份样本连续测定20 次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批间差：选取3个不同批次的试剂盒分别对低、中、高值定值样本进行定量测定，每个样本使用同一试剂盒重复测定8次，分别计算不同浓度样本的平均值及SD值。
批内差： CV<10%
批间差： CV<12%

线性

在定值血清及血浆样本内加入适量的硝基酪氨酸(NT)，并倍比稀释成1:2，1:4，1:8，1:16的待测样本，线性范围即为稀释后样本中硝基酪氨酸(NT)含量的测定值与理论值的比率。

样本 1:2 1:4 1:8 1:16
serum(n=5) 90-97% 80-89% 78-94% 80-99%
EDTA plasma(n=5) 86-101% 80-103% 81-93% 79-90%

稳定性

经测定，试剂盒在有效期内按推荐温度保存，其活性降低率小于5%。
为减小外部因素对试剂盒破坏前后检测值的影响，实验室的环境条件需尽量保持一致，尤其是实验室内温度、湿度及温育条件。其次由同一实验员来进行操作可减少人为误差。

实验流程

1. 实验前标准品、试剂及样本的准备；
2. 加样（标准品及样本）50µL，
    加入50µL检测液A(临用前配制);
    37°C温育1小时。
3. 洗板3次；
4. 加检测溶液B100µL，37°C孵育30分钟；
5. 洗板5次；
6. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分钟；
7. 加终止液50µL，立即450nm读数。

实验原理

本试剂盒应用竞争抑制酶联免疫分析法测定标本中待测物质水平。将硝基酪氨酸(NT)单克隆抗体包被微孔板，制成固相载体，往包被抗体的微孔中同时加入生物素标记的抗原和待测抗原(标准品或样本)，待测抗原与生物素标记抗原对特异性抗体进行竞争结合。温育后经洗涤去掉未结合物，然后加入HRP标记的亲和素，经过温育和彻底洗涤后加入底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。待测标本浓度越高，标记抗原和抗体的结合就越受到抑制，显色愈浅。显色的深浅与酶量呈正相关，而与样品中待测物质含量呈负相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（O.D.值），计算样品浓度。

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参考文献

杂志 参考文献
Molecular Medicine Reports 3-Nitrotyrosine, a biomarker for cardiomyocyte apoptosis induced by diabetic cardiomyopathy in a rat model [Pubmed: 23970331]
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