总抗氧化能力检测试剂盒(A015-1)
使用说明书
仅供体外研究使用，不用于临床诊断!
第1版（2016年04月修订）
[预期应用]
本试剂盒可测血清、血浆、组织，植物提取液等样本中总抗氧化能力（T-AOC）。
机体防御体系的抗氧化能力的强弱与健康程度存在着密切联系。该防御体系包括酶促体系与非酶促体系。许多酶是以微量元素为话性中心，例如:超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX）、过氧化氢酶(CAT). 谷胱甘肽-S-转移商(GST)等，非酶促反应体系中主要为维生素、氨基酸和金属蛋白质。例如，VE、胡萝卜素、VC、半胱氨酸、蛋氨服、色氨被、组氨酸、葡萄糖、铜兰蛋白、转铁蛋白、乳铁蛋白等。这个体系的防护氧化作用主要通过三条途径。(1)消除自由基和活性氧以免引发脂质过氧化: (2)分解过氧化物，阻断过氧化链。(3)除去起催化作用的金属离子。防御体系各成份之间相互起到了协同作用，以及代偿作用与依赖作用。
[试剂盒内容]
试剂 | 数量(96T/48T) | 试剂 | 数量(96T/48T) |
Reagent 1 | 2×60ml/1×60ml | Reagent 4 | 1×24ml/1×12ml |
Reagent 2 | 2/1 | Reagent 5 | 1×24ml/1×12ml |
Reagent 3 | 1×5ml/1×3ml | 说明书 | 1 |
Reagent 3稀释液 | 1×60ml/1×30ml |
[需自备的设备及试剂]
1、分光光度计（比色测定波长为520nm）
2、恒温水浴箱或恒温箱（孵育温度：37℃和90～100℃）
3、台式离心机
4、微量移液器及吸头
5、漩涡混合仪
6、蒸馏水或去离子水
[试剂盒的储存及有效期]
试剂盒2-8℃可保存6个月
1. Reagent 1：无色液体, 2-8℃保存。
2. Reagent 2：白色晶体, 2-8℃避光保存。
3. Reagent 3：黄色溶液， -20℃避光可保存1年。
4. Reagent 3稀释液：2-8℃保存。
5. Reagent 4：无色粘稠液体，室温保存。
6. Reagent 5：无色液体, 室温保存。
[试剂准备]
1. Reagent 2配制：使用时，加入120ml双蒸馏水溶解（粉末难溶，可置于37℃加快溶解速度）。
2. Reagent 3工作液制备：用R3稀释液按1：19的比例稀释R3。建议在使用前按所需量配制。
[标本处理]
1. 组织样本
预处理：准确称量样品，按比例加入生理盐水，如1g样品加入9g生理盐水。在冰上匀浆，于4oC，12000 rpm/min 离心5min ，取上清液用于实验。
注意：对于组织样本和细胞，需检测总蛋白浓度。建议使用IS003 BCA蛋白定量检测试剂盒测定蛋白质浓度。
2. 全血
收集抗凝全血（肝素为抗凝剂），轻轻颠倒充分抗凝后，可直接定量吸取全血，用冷双蒸水按1：9比例制备溶血液，如取0.02ml全血，加入0.18ml双蒸水，混匀后制备1：9全血稀释液；也可定量吸取全血，转入EP管，低温冻存（温度越低越好），测定之前解冻并按比例加入冷双蒸水制成1：9全血稀释液用于检测。
注意：不推荐使用EDTA作为抗凝剂。
[操作步骤]
1. 血清/血浆 T-AOC 实验
操作表:
样本管 (U) (ml) | 对照管 (C) (ml) | |
Reagent 1 | 1 | 1 |
血清/血浆 | a* | |
Reagent 2 | 2 | 2 |
| Reagent 3工作液 | 0.5 | 0.5 |
| 用漩涡混合仪混匀，37℃水浴30分钟。 | ||
Reagent 4 | 0.1 | 0.1 |
血清/血浆 | a* | |
| 静置10分钟， 移液至比色皿（1cm light path）， 在520nm波长测量各孔O.D.值（用蒸馏水调零）。 | ||
* 推荐样本量：血清/血浆, a*=0.1ml.
2. 组织T-AOC实验
操作表:
样本管 (U) (ml) | 对照管 (C) (ml) | |
Reagent 1 | 1 | 1 |
10%组织匀浆 | a* | |
Reagent 2 | 2 | 2 |
| Reagent 3工作液 | 0.5 | 0.5 |
| 用漩涡混合仪混匀，37℃水浴30分钟。 | ||
Reagent 4 | 0.2 | 0.2 |
| 10%组织匀浆 | a* | |
| Reagent 5 | 0.2 | 0.2 |
| 静置10分钟， 移液至比色皿（1cm light path）， 在520nm波长测量各孔O.D.值（用蒸馏水调零）。 | ||
* 推荐样本量：10%组织匀浆, a*= 0.1~0.2ml.
3. 全血T-AOC实验
操作表:
样本管 (U) (ml) | 对照管 (C) (ml) | |
Reagent 1 | 1 | 1 |
1:9全血稀释液 | a* | |
Reagent 2 | 2 | 2 |
| Reagent 3工作液 | 0.5 | 0.5 |
| 用漩涡混合仪混匀，37℃水浴30分钟 | ||
Reagent 4 | 0.1 | 0.1 |
1:9全血稀释液 | a* | |
| 静置10分钟， 移液至比色皿（1cm light path）， 在520nm波长测量各孔O.D.值（用蒸馏水调零）。 | ||
* 推荐样本量：1:9全血稀释液, a*=0.05ml.
[实验原理]
生物体内含有多种抗氧化的化合物，能将Fe3+还原成Fe2+，Fe2+与菲罗啉反应生成稳定的络合物。它可以通过测量OD值来计算T-AOC。
[说明]
1. 样本不立即用于实验（如血清、血浆、组织等），可置于-80℃或低于-20℃保存。保存温度越低样本保存时间越长。
2. 垂直加样品和试剂，不要滴到试管表面。
3. 可加入Reagent 1后加入样品，需充分混合。
4. 如果检测如鼓膜组织、牙髓等微型样本，请用煮沸的肥皂液彻底清洁试管。
5. 请选用洁净的试管， 用于检测T-AOC、总氨基酸、VC、Ve的试管不建议用于测定SOD、GSH-PX、ATPase等，以免试管的残留物影响酶活性。
6. 用于T-AOC、总氨基酸、VC、Ve的试管洗涤时，先用煮沸的热洗涤剂溶液洗涤再，再用自来水冲洗10次以上，然后用蒸馏水漂洗一次，烘干或晾干， 以避免其他酶影响测量结果。
7. 实验中，在37℃水浴30分钟后试管中会出现一些沉积物，这些沉积物在加入Reagent 4后会消失，不会影响结果。
8. 为了使液体混合均匀，推荐使用涡流混合仪。
9. Reagent 4不易吸取，移液时，请缓慢吸取和加入。
10. 该试剂盒仅供体外科研和实验室使用。
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MSDA
