血管钙化(VC)大鼠模型

Rat Model for Vascular Calcification (VC)

  • SPF
  • 编号DSI845Ra01
  • 物种Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 相同的名称,不同的物种。
  • 原型物种Human
  • 来源维生素D3(Vitamin D3) 导致
  • 模式动物品系SPF级SD大鼠,健康,6~8W,雄性,体重180g-200g
  • 实验分组实验分六组:正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组
  • 实验周期8 weeks
  • 建模方法血管钙化动物模型
    每日维生素D3(Vitamin D3) 30万IU/kg体重肌肉注射,连续四周;
    每日尼古丁灌胃两次:将尼古丁溶于花生油灌胃(25mg/kg),9h后再灌胃1次,连续四周。
    注意事项:
    维生素D3主要造成血管钙化,尼古丁刺激心跳加速血压升高每次灌胃完都要观察动物状态,老鼠灌胃后会抽搐,需要人工按压给缓解。

    血浆制备:模型制备结束,各组大鼠用戊巴比妥钠深度麻醉大鼠,腹主动脉取血,注入含7.5%EDTA 二钠30ul、40ul 和抑肽酶40ul 的试管中,离心分离血浆。-20℃保存待测。
    组织制备:各组大鼠取血后处死,取大鼠胸主动脉段,置入4%多聚甲醛固定液中,脱水,石蜡包埋,切片,备用
    病理组织进行Von Kossa染色。
  • 应用疾病模型
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  • 规格 每例
  • 价格 ¥ 780
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  • 血管钙化(VC)大鼠模型 产品包装(模拟)
  • 血管钙化(VC)大鼠模型 产品包装(模拟)
  • 血管钙化(VC)大鼠模型 Fig.Von Kossa staining of Aortic vessels in model rat
  • Certificate 通过ISO 9001、ISO 13485质量体系认证

模型评价

1.血管钙含量测定: 取10mg腹主动脉溶于硝酸消化、烤干,用含有
27nmol/LKCl和 27μmol/L LaCl3的去离子水复溶,用原子分光光度计在442.7nm
处读取吸光度,后换算成组织钙含量(以μmol/gdw 表示)
2.ALP活性测定:取腹主动脉匀浆,8000×g离心10 min,取上清液。考马
斯亮蓝法蛋白定量。按试剂盒说明方法测定血管组织ALP活性,紫外分光光度计
在405nm处读取吸光度。具体步骤:加入缓冲液,370C孵育30min,NaOH终止反应,测定405nm下的吸收值。ALP活性用p2硝基苯酚为标准值计算,1单位表示30min内产生1nM硝基酚的活性。BCA法测定总蛋白定量,校正ALP活性。

组织病理学

病理组织Von Kossa染色:
取大鼠胸主动脉段,用石蜡包埋胸主动脉后切片,4μm厚切片,常规脱蜡、脱水。1%硝酸银溶液浸泡,日光下照射30min后,将玻片浸入5%硫代硫酸钠溶液1min,后用碱性品红返染。脱水、透明、封片,用光镜观察。

主动脉钙化面积百分比测算:取主动脉弓至胸主动脉段血管1cm,沿纵
轴剪开后Von Kossa 染色,用Image-Pro Plus 6.0 病理图像分析软件计算各实验
组大鼠钙化斑块面积百分比。

免疫组化法观察RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG水平:DAB显
色,苏木素复染,常规梯度乙醇脱水,中性树胶封片观察。阴性对照以PBS代替一抗进行染色。每只大鼠随机取3张结肠切片,每张切片光学显微镜下随机选取5个高倍视野,统计每个视野中阳性组织细胞的积分光密度值(IOD值)与检测面积的比值,即平均光密度值(MOD),以代表染色强度。

标志因子水平

Western blot 检测RUNX2、BMP2、RANK/RANKL/OPG 蛋白表达

统计学分析

应用SPSS软件进行统计分析,计量资料以均数±标准差(x ±s)表示,采用t检验,组间比较采用单因素方差分析,P<0.05表示有显

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编号 适用物种:Rattus norvegicus (Rat,大鼠) 应用(仅供研究使用,不用于临床诊断!)
DSI845Ra01 血管钙化(VC)大鼠模型 疾病模型
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